濟南免疫親和柱的測定原理和操作流程

更新時間：2021-03-21

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　　濟南免疫親和柱測定的基礎是抗原抗體反應，B1單克隆抗體連接在柱內凝膠介質上，樣品中的經過提取、過濾、稀釋，然后將樣品提取液緩慢通過免疫親和柱，在免疫親和柱內，與抗體結合，洗滌液通過免疫親和柱除去未被結合的雜質。采用甲醇洗脫，然后進行相關分析。

　　濟南免疫親和柱的操作流程：

　　①樣品處理：參照各法，對樣品進行處理。

　　②凈化：

　　（1）柱子預處理：取出免疫親和柱，恢復至室溫，將上端塞子取出，打開下端堵頭，將柱內保存液流掉至高于凝膠上界面3-5mm處，停止流液（或將免疫層析柱直接連接于20ml注射器下）。

　　（2）加樣：加入處理好的樣品液10ml，打開下端堵頭，調節流速至1-2滴/秒，直至空氣進入親和柱中，棄去流出液。

　　（3）淋洗：液體*排凈后，依次用PBS緩沖液10ml、蒸餾水10ml，淋洗，流速為1-2滴/秒，棄掉流出液，抽干。

　　（4）洗脫：加入色譜級溶液，調節流速為1滴/秒，緩慢洗脫，收集全部洗脫液，用色譜級溶液定容至1ml（即為凈化后的樣品）。

　　③檢測

　　凈化后樣品可直接用HPLC（高效液相色譜法）、GC-MS（氣相色譜-質譜聯用儀）、ELISA（酶聯免疫吸附法）等方法進行檢測。